激光扫描共焦显微镜特点及其应用
作者:全球MRO综合服务商 仪器仪表技术文章来源:全球MRO仪器仪表交易网 点击数: 更新时间:2006-9-13
激光扫描共焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)是上世纪80年代开始投入实际应用的一种显微设备。与普通光学显微镜相比,LSCM具有更高的分辨率和放大倍率,并可以对观测样品进行分层扫描,实现样品的三维重建和测量分析; 与电子显微镜相比,LSCM可以在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值和膜电位等生理信号及活细胞形态的实时动态变化。因此,这项产品的面世是显微成像技术发展史中具有划时代意义的重大进展。LSCM在形态学、分子细胞生物学、神经学、药理学、遗传学等生物医学领域,以及材料学、地质学、水利学等工业工程领域有着广泛的应用。根据应用方向的不同,可分为生物用激光扫描共焦显微镜和工业用激光扫描共焦显微镜。
一.LSCM的基本原理及结构特点
普通光学显微镜使用的卤素灯光源为混合光,光谱范围宽,成像时样品上每个照光点均会受到色差影响以及由照射光引起的散射和衍射的干扰,影响成像质量。而LSCM结构上采用精密共焦空间滤波,形成物象共轭的独特设计,激光经物镜焦平面上针孔形成点光源对样品扫描,于测量透镜焦平面的探测针孔处经空间滤波后,有效地抑制同焦平面上非测量光点形成的杂散荧光和样品不同焦平面发射来的干扰荧光。这是因为光学系统物象共轭,只有物镜焦平面上的点经针孔空间滤波才能形成光点图像,扫描后可得到信噪比极高的光学断层图像,分辨率比普通光学显微镜提高1.4倍。LSCM的光源为激光,单色性好,基本消色差,成像聚焦后焦深小,纵向分辨率高,可无损伤地对样品作不同深度的层扫描和荧光强度测量,不同焦平面的光学切片经三维重建后能得到样品的三维立体结构,这种功能被形象地称为“显微CT”。
LSCM由显微镜光学系统,激光光源,扫描装置和检测系统构成,整套仪器由计算机控制,各部件之间的操作切换都可在
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