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激光扫描共焦显微镜特点及其应用
作者:全球MRO综合服务商    仪器仪表技术文章来源:全球MRO仪器仪表交易网    点击数:    更新时间:2006-9-13

计算机操作平台界面中方便灵活地进行。显微镜是LSCM的主要组件,它关系到系统的成像质量。通常有倒置和正置两种形式,前者在活细胞检测等生物医学应用中使用更广泛。

    二.LSCM的生物医学应用

    LSCM的高灵敏度、高分辨率、高放大倍数,提供了光学显微镜无法显示的结构,使细胞生物学研究上了一个台阶。目前我们可以在亚细胞水平进行动态实验,检测细胞生物质和离子通道的变化,观察细胞在生理、病理和药理情况下对外界因素作用所产生的快速反应,进行定性、定量、定时和定位的分析测量。最常用的功能是细胞三维重建、细胞荧光检测等。
    1. 细胞的三维重建
    普通荧光显微镜分辨率低,显示的图像结构为多层面的图像叠加,结构不够清晰。LSCM能以0.1μm的步距沿轴向对细胞进行分层扫描,得到一组光学切片,经A/D转换后作为二维数组贮存。这些数组通过计算机进行不同的三维重建算法,可作单色或双色图像处理,组合成细胞真实的三维结构。旋转不同角度可观察各侧面的表面形态,也可从不同的断面观察细胞内部结构,测量细胞的长宽高、体积和断层面积等形态学参数。通过模拟荧光处理算法,可以产生在不同照明角度形成的阴影效果,突出立体感。通过角度旋转和细胞位置变化可产生三维动画效果。LSCM的三维重建广泛用于各类细胞骨架和形态学分析、染色体分析、细胞程序化死亡的观察、细胞内细胞质和细胞器的结构变化的分析和探测等方面。
    2. 细胞定量荧光测定
    显微荧光光度计由于显微镜和激发光源的限制成像模糊,只能测定细胞内的荧光总量,有一定的误差。LSCM以激光为光源,对细胞分层扫描,单独测定,经积分后能得到细胞荧光的准确定量,重复性极佳。它适于活细胞的定量分析,可测定细胞内溶酶体、线粒体、DNA含量、RNA含量、酶和结构性蛋白质等物质含量和分布,常用于原位分子杂交、肿瘤细胞识别、单个活细胞水平的DNA损伤及修复的定量分析。它适于快速高灵敏度测量,减少光猝灭的影响,在定量免疫荧光测定

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