气相色谱法测定真菌的脂肪酸组成
作者:全球MRO综合服务商 仪器仪表技术文章来源:全球MRO仪器仪表交易网 点击数: 更新时间:2006-3-23
ml具塞试管中,加入1∶1苯-石油醚2 ml,浸提15 min后,再加入0.5 mol/lNaOH-CH3OH溶液2 ml,振摇后置于50℃水浴约15 min,取出后沿管壁加入蒸馏水使有机层上升至试管上部,静置分层后,取上层清液2μl作气相色谱分析。
3 结果与讨论
3.1 定性及定量分析
实验采用脂肪酸甲酯标准物作保留时间对照和峰高增量法定性。由于各脂肪酸为同系物,可以视相对校正因子为1,采取面积归一化法可测定脂肪酸组成。
3.4 方法的选择及优点
1.色谱柱的选择:考虑到脂肪酸酯类的极性,根据相似相溶原理,选用交联型固定液FFAP,它不仅适于分离脂肪酸酯类,而且热稳定性较好,高温不易氧化和流失;即便在高温操作,基线也只有很小的漂移。由于真菌的脂肪酸组成复杂,如用填充柱色谱,由于其柱效低,不能良好地分离各组分。而毛细管柱的柱径小,柱较长,因此柱效高,能使脂肪酸组分在柱内进行反复分配,并得以完全分离。因此选用毛细管气相色谱法测定。
2.载气柱前压的设置:载气压力设置过低,会使谱峰的半峰宽增加,或出现拖尾峰,分析时间也较长;载气压力过高,又会使相邻的峰不能完全分离,甚至出现谱峰重合现象。这些情况都会影响定性定量的准确性。经过多次实验,结果表明,当设置载气柱前压为81 kPa时,与柱前压为50 kPa时相比,出峰时间提前了近一倍,并且不影响出峰数目及分离效果,能准确地分离出30多种组分。
3.程序升温的设置:由于真菌的脂肪酸组成很复杂,如果采用恒温分析,谱峰无法得到良好的分离,所以需要设置程序升温,使各个组分按沸点高低依次出峰。多次实验表明,程序升温190℃(1 min)—230℃(4 min),每分钟升6℃ ,在此条件下,能分离出30多个组分,并且EPA出峰时间还不到6 min,只需要10 min即可完成一次分析。
4 总 结
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